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本制品是DNA聚合酶I的N末端截短物，它保留了DNA聚合酶活性，但缺乏单链特异3'→5'外切酶活性、双链特异性5'→3'外切酶活性，用于补齐凹陷的双链DNA的3'端、随机引物标记和测序等分子生物学实验。

• 用随机引物制备探针；
  
• 随机引物法标记；
  
• cDNA第二条链的合成。

• 使用时将酶置于冰上操作，使用完毕后-20℃保存。
  
• Klenow Fragment（3'→5'exo^-）因去除了3'→5'核酸外切酶的活性，在末端补平时经常会在3'末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于生成平末端，而用于连接反应。
  
• 金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐，大剂量的无机磷酸盐均对酶有抑制作用。

• 双链DNA 5'突出末端的标记
  
  • 试剂融化后，在冰上配制如下反应体系：
    

    成分	用量
    模板DNA	0.1～4μg
    10×Klenow Reaction Buffer	2μL
    未标记的dNTPs(10mM)	2μL
    [α-32P]-dNTP,~15～30 TBq/mmol(400～800Ci/mmol) 或[α-32P]-dNTP,~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)	0.74 MBq(20μCi) 或2.96 MBq(80μCi)
    Klenow片段(3'→5'exo-,5U/μL)	0.2μL(1U)
    ddH2O	至20μL

  • 轻轻混匀后瞬时离心。
    
  • 30℃孵育15分钟。
    
  • 75℃孵育20分钟终止反应。
• 随机引物法进行DNA标记
  
  • 试剂融化后，在冰上配制如下反应体系：
    

    成分	用量
    模板DNA	100ng
    10×Klenow Reaction Buffer	5μL
    125μM随机引物	10μL
    ddH2O	至40μL
    沸水中孵育5～10分钟，立即置于冰上，并瞬时离心
    未标记的dNTPs(10mM)	1μL
    [α-32P]-dNTP,~110TBq/mmol(3000Ci/mmol)	1.85MBq(50μCi)
    Klenow片段(3'→5'exo-,5U/μL)	0.2μL(1U)
    ddH2O	至50μL

  • 轻轻混匀并瞬时离心。
    
  • 如果使用随机八聚体引物，37℃孵育10分钟，如果使用随机十聚体引物，37℃孵育5分钟。
    
  • 加入终浓度为10mM的EDTA终止反应。
    
  • 检测标记效率后即可作为探针使用。